Мультистероидный анализ крови: определение жизненно необходимых гормонов человека на качественно новом уровне

  Термином «мультистероидный анализ» называют определение профиля стероидных гормонов методом хромато-масс-спектрометрии. Совокупность результатов этого анализа обозначают термином «стероидный профиль». В сущности, это два равнозначных термина, обозначающих одно и то же.

  Мультистероидный анализ - это отечественная разработка, методика анализа валидирована и аттестована как "Методика (метод) измерений массовой концентрации стероидных гормонов в пробах крови методом жидкостной хроматографии - тандемной масс-спектрометрии. МУ 08–47/376", зарегистрирована в реестре РОССТАНДАРТА под номером ФР.1.31.2015.21875.

  В настоящее время мультистероидный анализ не входит в список тестов, утвержденных Министерством здравоохранения РФ, и осуществляется в рамках проведения научного исследования. Пациенты сами вынуждены оплачивать стоимость проведения данного анализа. Ведётся работа над тем, чтобы в будущем эти расходы покрывались за счет страховой медицины.

  Количественное определение основных стероидных гормонов и их метаболитов в сыворотке крови или в слюнной жидкости референсным методом - тандемной хромато-масс-спектрометрией (в научной литературе этот метод также обозначается как LC-MS/MS) – трудоёмкая и дорогостоящая процедура. Ключевой особенностью метода является возможность определения всех заявленных аналитов в ходе одного анализа (рис. 1), поэтому в пересчете на один аналит стоимость определения получается едва ли не меньше, чем альтернативными иммунохимическими методами.

Рис 1. Аналиты, определяемые в ходе одного анализа, согласно методике

Почему в названии методики присутствует обозначение биоматериала "кровь"?

Для того, чтобы сразу обозначить отличие его от широко известного анализа "стероидный профиль мочи". Следует отметить, что информативность анализа мочи совсем другая и требует иной трактовки, поскольку в моче содержатся в основном неактивные формы стероидов: сульфаты, глюкурониды и гидроксилированные производные, уже ненужные организму, и выведенные из него. В крови же определяют концентрации активных форм стероидных гормонов, которые циркулируют в системе общего кровоснабжения, поступают в клетки и оказывают сигнальное воздействие на геном.

При каких медицинских состояниях показано определение стероидного профиля крови, каким врачам стероидный профиль крови поможет с постановкой диагноза?

1. Всевозможные формы врожденной дисфункции коры надпочечников (ВДКН). ВДКН является врожденным заболеванием, проявляющемся в нарушении биосинтеза стероидов. Вызывается нарушением функционирования одного из 5 ферментов коры надпочечников. Это может быть дефицит 21a-гидроксилазы (CYP21) или 11b-гидроксилазы (CYP11B1). Традиционный скрининг новорожденных на ВДКН методами иммуноанализа зачастую дает ложноположительные результаты при определении 17-гидроксипрогестерона. Поэтому во всех спорных случаях необходима подтверждающая диагностика методом LC-MS/MS [1]. Диагностика неклассической формы ВДКН (НФ ВДКН) иммунохимическими методами представляет значительную трудность, поэтому НФ ВДКН зачастую не диагностируется при неонатальном скрининге, но даёт о себе знать в последствии: у подростков появляется преждевременное оволосение, угревая сыпь; у девочек – гирсутизм, менструальная дисфункция, репродуктивные нарушения. Для стероидного профиля при НФ ВДКН характерно повышение 21-дезоксикортизола и 17-ОН-прогестерона, поэтому мультистероидный анализ в комплексе с генетическим тестированием чрезвычайно полезны для диагностики этого заболевания.

2. Надпочечниковая недостаточность. Для этого проводится стимуляционный тест с АКТГ и измеряются уровни кортизола, альдостерона, и 11-дезоксикортизола: базальные, через 30 и 60 минут после стимуляции. При первичной надпочечниковой недостаточности альдостерон не реагирует на стимуляцию, в то время как при вторичной недостаточности регистрируется повышение его уровня. В контрольной группе уровень 11-дезоксикортизола повышается в 15-20 раз в ответ на стимуляцию АКТГ, а кортизола – примерно в 3 раза [2].

3. Гипогонадизм у мужчин. Для правильной диагностики гипогонадизма у мужчин требуется определение точного уровня общего тестостерона (ТТ) с использованием масс-спектрометрии. В исследовании на 10000 добровольцах было установлено, что диагноз гипогонадизма можно поставить, если концентрация ТТ ниже 12.1 нмоль/л по данным масс-спектрометрии [3].

4. Контроль заместительной терапии у мужчин и женщин (HRT). Для данной категории пациентов масс-спектрометрия является «золотым стандартом», так как позволяет подобрать правильную терапевтическую дозу гормона (или стимулятора), детально проследить за реакцией всех метаболитов на заместительную терапию и избежать интерференции, присущей иммунохимическим методам [4-6].

5. Очень важно отслеживать уровни стероидных гормонов в ходе беременности и в течение одного года после родов. Мультистероидный анализ даёт гораздо более точную информацию об андрогенном статусе по сравнению с традиционным ДГЭА-сульфатом.

6. Гинекология. «Вирилизирующие» (андрогенпродуцирующие) опухоли надпочечников обладают андрогенпродуцирующей активностью и обусловливают развитие вирильного синдрома у женщин. Установлено, что практически любая гормонально активная опухоль яичников может быть источником избыточной продукции андрогенов и/или эстрогенов и должна быть диагностирована с использованием метода тандемной масс-спектрометрии [7].

7. Диабет. Данное заболевание затрагивает на нервную систему и оказывает влияние на концентрацию нейростероидов. LC-MS/MS дает возможность определять концентрации нейроактивных стероидов с целью разработки новых подходов в лечении диабетической нефропатии [8].

8. Спортивная медицина. Стероидный профиль у спортсменов в крови и в слюне может дать важную информацию о состоянии их здоровья, спортивной форме, контролировать ход тренировок за счет оптимального распределения нагрузок.

  Мультистероидный анализ с трудом пробивает для себя место в жизни с учетом широкого распространения методов иммуноанализа и сопротивления со стороны приверженцев традиционных технологий. Но за этим методом будущее, это уже признано лучшими представителями медицинской науки [9].

Литература.

  1. Rauh M. Steroid measurement with LC-MS/MS in pediatric endocrinology. Molecular and cellular endocrinology, 2009, 301, 272-281.
  2. Stolze BR, Gounden V, Gu J, Elliott EA, Masika LS, Abel BS, Merke DP, Skarulis MC, Soldin SJ. An improved micro-method for the measurement of steroid profiles by APPI-LC-MS/MS and its use in assessing diurnal effects on steroid concentrations and optimizing the diagnosis and treatment of adrenal insufficiency and CAH. J Steroid Biochem Mol Biol. 2015 Dec 22. pii: S0960-0760(15)30165-5. doi: 10.1016/j.jsbmb.2015.12.024
  3. Bhasin S, Pencina M, Jasuja GK, et al. Reference ranges for testosterone in men generated using liquid chromatography tandem mass spectrometry in a community-based sample of healthy nonobese young men in the Framingham Heart Study and applied to three geographically distinct cohorts. J Clin Endocrinol Metab 2011;96:2430–9.
  4. Lunenfeld B., Mskhalaya G, Zitzmann M, Arver S, Kalinchenko S, Tishova Y, Morgentaler A. Recommendations on the diagnosis, treatment and monitoring of hypogonadism in men. Aging Male, 2015, 18, 1, 5–15.
  5. Simoni M, Fanelli F, Roli L. Methodology for measuring testosterone, dihydrotestosterone and sex hormone binding globulin in a clinical setting, in: Nieschlag E, Behre HM, Nieschlag S (Eds.), Testosterone: Action, Deficiency,Substitution, 4th ed., Cambridge: Cambridge University Press, 2012, 60-86.
  6. Dimopouloua C, Ceausub I, Depyperec H, Lambrinoudakid I, Muecke A, Pérez-Lópezf FR, Reesg M, van der Schouwh YT, Senturki LM, Simonsinij T, Stevensonk JC, Stutel P, Goulism DG. EMAS position statement: Testosterone replacement therapy in the aging male. Maturitas, 2015.
  7. Короткова С.А., Богданова Е.А., Казначеева Т.В., Зубкова Н.А., Глыбина Т.М., Буллих А.В. Редкие заболевания в гинекологии: андрогенпродуцирующие опухоли яичников. Акушерство и гинекология. Медицинский вестник МВД, 2012, 2, 57, 38-42.
  8. Dhindsa S, Reddy A, Karam JS, Bilkis S, Chaurasia A, Mehta A, Raja KP, Batra M, Dandona P. Prevalence of subnormal testosterone concentrations in men with type 2 diabetes and chronic kidney disease. Eur J Endocrinol. 2015 Sep;173(3):359-66. doi: 10.1530/EJE-15-0359.
  9. Taylor AE, Keevil B, Huhtaniemi IT. Mass spectrometry and immunoassay: how to measure steroid hormones today and tomorrow. Eur J Endocrinol. 2015, 173(2):D1-12. doi: 10.1530/EJE-15-0338.